在生物学中，DNA的半保留复制是一个至关重要的过程，它确保了遗传信息能够准确无误地传递给下一代细胞。这一机制首先由Watson和Crick提出，并通过后续实验得到了证实。那么，DNA半保留复制具体使用了哪些方法呢？

一、双链分离

首先，DNA双螺旋结构需要被解开。这个过程依赖于一种叫做解旋酶（helicase）的酶。解旋酶沿着DNA分子移动，将两条互补的DNA链分开，形成所谓的“复制叉”。在这个过程中，单链结合蛋白（SSBPs）会暂时附着在暴露的单链上，防止它们重新配对或退火。

二、引物合成

一旦DNA双链被分开，RNA引物就需要被合成出来。这是由引物酶（primase）完成的。RNA引物提供了自由的3'-OH末端，这对于后续的DNA聚合反应是必需的。因为DNA聚合酶不能从头开始合成新的DNA链，它只能在已有的3'-OH基团上添加核苷酸。

三、DNA链延伸

接下来，DNA聚合酶开始工作。这种酶以每条模板链为指导，按照碱基配对原则（A-T, G-C），逐个添加脱氧核糖核苷酸到正在生长的DNA链上。值得注意的是，在原核生物中，主要是DNA聚合酶III负责主要的链延长；而在真核生物中，则有多个不同的DNA聚合酶参与此过程，包括DNA聚合酶α、δ和ε等。

四、连接与校正

由于DNA聚合酶具有校对功能，它可以识别并移除错误插入的核苷酸，从而保证复制的高度准确性。此外，在某些情况下，可能还需要DNA连接酶来连接相邻片段之间的缺口，最终完成完整的DNA双链。

五、半保留特性

最后，我们来看看为什么说这是半保留复制。当原始的双链DNA分子被完全复制后，每个新形成的DNA分子都包含了一条旧链和一条新链。这意味着遗传信息得以完整地保存下来，并且可以在未来的分裂周期中继续发挥作用。

综上所述，DNA半保留复制涉及到了多种复杂而精密的步骤和技术手段。从最初的双链分离到最后的新链组装，每一个环节都需要特定的蛋白质因子以及严格的调控机制来确保其顺利完成。这些过程不仅展示了生命科学领域的奇迹，也为理解基因表达调控奠定了基础。